羽绒样品的萃取条件探讨
摘要
本文对羽绒微生物项目检测过程中的样品萃取条件对进行一些探讨，分析了其萃取的温度与振荡速率对嗜温性需氧菌计数结果造成的影响，提出了关于萃取条件的一些建议。
本文对羽绒微生物项目检测过程中的样品萃取条件对进行一些探讨，分析了其萃取的温度与振荡速率对嗜温性需氧菌计数结果造成的影响，提出了关于萃取条件的一些建议。
关键词：羽绒微生物；温度；振荡速率
1 引言
目前，羽绒微生物检测方法中对样品的萃取条件中的温度、振荡速率并没有做出统一的规定，通过沟通了解到，不同检测机构、不同检测人员之间由于对标准的理解不尽相同，在萃取条件选择方面也有一些明显的差异，使同一批次的羽绒样品检测结果有很大的差异，给我们羽绒检测的工作带来很大的困惑。而萃取条件的差异会对嗜温性需氧菌结果计数带来什么影响？什么样的萃取条件才是比较合适的？本文就这两方面提出自己的一些观点，希望在以后的检测中不断完善检测方法，以求检测结果更加准确可靠。
2 不同萃取条件下的比对试验
萃取条件的差异会对嗜温性需氧菌结果计数会有什么影响呢？针对这个问题，选取了一些有代表性的样品，在不同萃取条件下进行了相关的比对试验。
2.1比对试验
试验方法：FZ/T 80001-2002《水洗羽毛羽绒试验方法》
试验材料：羽绒样品
1）外部比对试验
选取了一些有代表性的羽绒样品，分别送往3个检测机构进行比对试验，第一次比对在萃取条件不同下进行，第二次比对在萃取条件相同的条件下进行。比对结果见表1、表2。
表1：第一批次羽绒样品用不同萃取条件得出的结果
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萃取条件 |
试验结果 |
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检测机构1# |
萃取温度：8 ℃ ；速率：70r/min |
5.0×104 CFU/g |
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检测机构2# |
萃取温度：40 ℃；速率：120r/min |
3.8×105 CFU/g |
|
检测机构3# |
萃取温度 ：26 ℃速率：尽量快 |
2.5×105 CFU/g |
表2：第二批次羽绒样品用相同的萃取条件得出的结果
|
|
萃取条件 |
试验结果 |
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检测机构1# |
萃取温度：24℃ ；速率：120r/min |
9.2×104 CFU/g |
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检测机构2# |
萃取温度：24℃ ；速率：120r/min |
1.0×105 CFU/g |
|
检测机构3# |
萃取温度：24℃ ；速率：120r/min |
1.2×105 CFU/g |
2）内部比对试验
试验设计：选取同一批次的27份羽绒样品，在不同温度：低温（10 ±2 ℃） 、室温（24±2 ℃ ）、高温（37±2 ℃）、不同的振荡速率：低速（70r/min）、中速（90 r/min）、高速（120 r/min）共九种萃取条件下萃取3h，测定其嗜温性需氧菌的菌落数。由三位人员测试三个平行试样。
试验步骤：将试样在不同的萃取条件下，无菌萃取3h，过滤萃取液，选取适合的稀释度，用平板计数法测定其嗜温性需氧菌菌落数，结果见表3。
表3：同一份样品九种萃取条件下试验结果 （单位：CFU/g）
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试样 |
振荡温度 | ||||
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低温
10 ±2 ℃ |
室温
24 ±2 ℃ |
高温
37 ±2 ℃ | |||
|
振荡速率 |
低速 70 r/min |
平行试样1# |
1.3×105 |
2.0×105 |
3.1×105 |
|
平行试样2# |
1.8×105 |
2.1×105 |
3.5×105 | ||
|
平行试样3# |
1.8×105 |
2.7×105 |
4.5×105 | ||
|
中速 90 r/min |
平行试样1# |
2.9×105 |
4.2×105 |
7.8×105 | |
|
平行试样2# |
3.7×105 |
4.8×105 |
10.0×105 | ||
|
平行试样3# |
3.3×105 |
5.3×105 |
8.9×105 | ||
|
快速 120r/min |
平行试样1# |
5.1×105 |
6.8×105 |
16.0×105 | |
|
平行试样2# |
5.0×105 |
7.5×105 |
21.0×105 | ||
|
平行试样3# |
5.5×105 |
8.2×105 |
23.0×105 | ||
3）比对试验结果分析
由比对的结果可以看出：萃取条件的不同对嗜温性需氧菌结果计数有很大的影响。在不同萃取条件下样品间的差异值很大，同一份批次的样品测试结果差异值达到了10倍以上甚至接近20倍，而且从图一曲线图可以明显看出嗜温性需氧菌菌落数值随着萃取温度、振荡速率的增加而增加，其中萃取温度对结果的影响尤其明显，在高温下萃取样品，其数值有突越性的增长。
4）萃取条件优化试验
为了对萃取条件进一步的优化，本文又设计另一个模拟试验对萃取条件进行进一步的验证 。
试验设计：
菌液准备：从新鲜培养出的嗜温性需氧菌中挑取一环菌落，经过24h的增菌培养，将增菌液稀释到适当的浓度。
羽绒样品制备：取一些经过高压蒸气灭菌处理过的羽绒样品，经平板计数法测定其本身的嗜温性需氧菌含量小于100CFU/g）。
试验过程：分别称取12g样品加入1200mL的空白萃取液中，然后取等量的增菌液加入萃取液中，在不同温度：低温（10 ±2 ℃） 、室温（24±2 ℃ ）、高温（37±2 ℃）、不同的振荡速率：低速（70r/min）、中速（90 r/min）、高速（120 r/min）共九种萃取条件下萃取3h，测定其菌落数。由三位人员测试三个平行试验。另外，再取等量的菌液加入1200mL的空白萃取液中，不经过振荡3h，混匀后直接测其菌落数，作为本试验的真实值，结果见表4。
表4：同一浓度的菌液在九种萃取条件下试验结果（单位：CFU/mL）
|
试验 |
振荡温度 |
不经振荡直接培养（真实值） | ||||
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低温 10 ±2 ℃ |
室温 24 ±2 ℃ |
高温 37 ±2 ℃ | ||||
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振荡速率 |
低速
70 r/min |
试验1# |
2.1×105 |
5.9×105 |
8.9×105 |
4.5×105 |
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试验2# |
2.9×105 |
5.8×105 |
7.8×105 | |||
|
试验3# |
2.5×105 |
5.3×105 |
9.2×105 | |||
|
中速
90 r/min |
试验1# |
3.5×105 |
7.3×105 |
9.8×105 | ||
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试验2# |
3.2×105 |
7.1×105 |
10.2×105 | |||
|
试验3# |
3.0×105 |
6.9×105 |
11.3×105 | |||
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快速120r/min |
试验1# |
4.8×105 |
8.5×105 |
14.3×105 | ||
|
试验2# |
5.1×105 |
7.8×105 |
12.5×105 | |||
|
试验3# |
5.3×105 |
8.1×105 |
13.8×105 | |||
由表4可以看出，在九种萃取条件中，低温、快速的萃取条件下得出试验结果值与真实值之间是最为接近的。而在其他萃取条件下得出的结果都与真实值间有比较明显的偏差。
由此可以得出结论：对于羽绒样品，在低温、快速的条件下萃取样品3h，不但能降低样品中的嗜温性需氧菌的活性，使样品在萃取过程中细菌没有出现显著增长的情况，而且能很好的把样品中的细菌洗脱到萃取液中。随着萃取温度的升高，萃取液中的细菌的活性越来越高，其自身繁殖情况也是越来严重，特别是在高温、高速的萃取条件下，萃取液中的细菌数会有显著的增加。
3 结束语
从上述的分析可以得出：
（1）样品萃取条件对嗜温性需氧菌的检测有明显的影响，标准检测方法中需要对萃取的条件做明确的规定，使不同人员，不同检测机构之间的试验条件达到统一，才能使检测的结果才具有可比性。
（2）对于大部分的嗜温性需氧菌，其对数生长期都是在短时间内发生的，在适当的营养和温度条件下，其样品本身的细菌会出现大量的繁殖，而在低温和相对静止的状态则能够明显的抑制其生长繁殖。对于羽绒试样这些需要比较长时间萃取的样品，结合样品本身的水溶性效果，建议在温度较低，振荡速率较快的的条件下对其进行萃取，这样既能够降低细菌的活性，减少细菌在振荡过程中出现自身繁殖，又能使样品进行充分的洗脱，使测试结果更加接近真实值。
稿件来源：《中国纤检》杂志
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